細(xì)胞發(fā)生空泡怎么辦？

“細(xì)胞空泡化”在細(xì)胞培養(yǎng)中也是一個常見問題，它的出現(xiàn)原因有多種，不少客戶碰到往往會很頭疼.......

實際上有不少細(xì)胞本身就存在一定的空泡，如HepG2，Caco-2等細(xì)胞。除此之外，千舍生物給大家列舉出了可能出現(xiàn)這種情況的原因，方便大家進(jìn)行分析選擇解決的方法：

問：可以引起細(xì)胞空泡化出現(xiàn)的原因有哪些？

答：1）細(xì)胞老化

原代細(xì)胞培養(yǎng)的過程中經(jīng)常出現(xiàn)這樣的情況，是有些細(xì)胞處于終末分化狀態(tài)，不會再分裂，時間長了就會空泡化而死亡。

傳代細(xì)胞出現(xiàn)這種狀況比較少見，出現(xiàn)的原因一般都是因為細(xì)胞傳代次數(shù)過多，老化嚴(yán)重。

2）PH值

培養(yǎng)液的PH值與細(xì)胞正常所需PH值差別太大。

3）胰酶消化

胰酶消化時間過長，會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)受損，有時也會出現(xiàn)這種情況。除此之外，如果消化細(xì)胞吹打時力度過大，產(chǎn)生太多氣泡，長期存在也會出現(xiàn)這種現(xiàn)象。

4）自噬

5）細(xì)胞代謝

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，由于血清濃度不夠、藥物作用、外界刺激等情況下導(dǎo)致細(xì)胞代謝出現(xiàn)問題，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀況下會出現(xiàn)細(xì)胞空泡化的情況。

6）污染

衣原體感染：一旦一些細(xì)胞出現(xiàn)空泡化，繼續(xù)培養(yǎng)，空泡范圍會擴(kuò)大，即使傳代后也如此，出現(xiàn)這種情況，細(xì)胞基本無法挽救。后來檢測發(fā)現(xiàn)，此種細(xì)胞存在衣原體的感染。

支原體污染：支原體污染在不嚴(yán)重的時候細(xì)胞是沒有什么明顯癥狀的，而且也無法通過光學(xué)顯微鏡觀察到，只有在嚴(yán)重的時候會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差，出現(xiàn)細(xì)胞空泡化的現(xiàn)象，細(xì)胞膜上也會出現(xiàn)小黑點附著。

7）藥物誘導(dǎo)

一些特定的誘導(dǎo)劑處理，是細(xì)胞質(zhì)空泡化的原因，一般是需要觀察細(xì)胞變化而對細(xì)胞進(jìn)行的特殊處理。

問：遇到細(xì)胞空泡化我們應(yīng)該如何解決？

答：1）如果是因為細(xì)胞老化的原因，可以通過復(fù)蘇代數(shù)靠前的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

2）如果是培養(yǎng)液PH的問題，可以通過更換培養(yǎng)液調(diào)整到合適的PH值，再進(jìn)行培養(yǎng)。

3）在傳代時，要選用合適濃度的胰酶和選取適當(dāng)?shù)南瘯r間進(jìn)行消化，在操作時避免吹打太過用力出現(xiàn)太多氣泡。

4）要保證細(xì)胞培養(yǎng)所需的營養(yǎng)充足，可以通過增加血清濃度和在培養(yǎng)基中加入谷氨酰氨解決。

5）盡量使用質(zhì)量好和渠道正規(guī)的胎牛血清，因為這樣的血清營養(yǎng)豐富且外源刺激因子少，可以有效的避免出現(xiàn)這類問題。

6）在細(xì)胞培養(yǎng)時要嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，操作時要規(guī)范，避免污染。可以通過試劑盒檢測細(xì)胞是否污染，對于已經(jīng)污染的細(xì)胞滅菌后直接處理，避免污染其他細(xì)胞。

   胞質(zhì)空泡化可以是可逆的，也可以是不可逆的?？赡娴陌|(zhì)空泡化通常只是在暴露于誘導(dǎo)劑后能觀察到，這種胞質(zhì)空泡化可以引起細(xì)胞狀態(tài)的改變或者細(xì)胞周期停滯。而不可逆的胞質(zhì)空泡化會導(dǎo)致細(xì)胞死亡，許多自然或者人工合成的化合物以及被細(xì)菌或者病毒感染后均會出現(xiàn)不可逆的胞質(zhì)空泡化，因此出現(xiàn)這種情況，細(xì)胞便不可再用于后續(xù)的實驗中。