細(xì)胞名稱：MDA-MB-453 人乳腺癌細(xì)胞（含STR鑒定）

貨號(hào)：WS066

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

一、細(xì)胞特性

1、 來源：乳腺；源自轉(zhuǎn)移灶：心包積液

2、 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，混合生長，貼壁與懸浮細(xì)胞同時(shí)存在。

3、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

A.準(zhǔn)備L15培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。                       

血清推薦WinSera   FBS500-WP-002

B.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，100%；該細(xì)胞培養(yǎng)不能通入CO2， 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

 注意事項(xiàng)：

  a. 無CO2培養(yǎng)。如果沒有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的，可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。

  b. 細(xì)胞形態(tài)是貼壁生長及懸浮生長混合，貼壁細(xì)胞形態(tài)是上皮樣（立方形或多邊形），但也有一些單個(gè)或成團(tuán)的懸浮細(xì)胞。

  c. 細(xì)胞復(fù)蘇后一段時(shí)間內(nèi)，貼壁不牢，大部分細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)，懸浮細(xì)胞不要丟棄，換液或傳代時(shí)可以將懸浮細(xì)胞收集離心后，重新加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。

C.凍存液：90%胎牛血清，10%DMSO 現(xiàn)用現(xiàn)配。

凍存液推薦WinSera  WS-1026-50ml/100ml

  儲(chǔ)存：液氮儲(chǔ)存

二、運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

1.復(fù)蘇發(fā)貨  a.T25瓶活細(xì)胞發(fā)貨或 b.血清重懸發(fā)貨
2. 凍存管發(fā)貨(干冰發(fā)貨)  

A.1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

B.T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

三、細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。